Перекрестный метод определения группы крови

Типирование крови по системе AB0 перекрестным методом наиболее часто выполняется при проверочном (подтверждающем) исследовании. Для анализа используются параллельно стандартные эритроциты и стандартные сыворотки или цоликлоны. Кроме определения группы крови перекрестный метод также позволяет определить присутствие специфичных эритроцитарных антител в сыворотке.

Для перекрестного метода определения группы крови https://sangvitest.ru/perekrestnyj-metod-opredeleniya-gruppy-krovi/ понадобится: стол лабораторный горизонтальный, осветительная лампа, планшет (стеклянный или пластиковый, луночный, на 6 лунок), стеклянные палочки, 6 штук, часы, пипетка Пастера. Необходимые реагенты: цоликлоны (анти-A, анти-B и анти-AB), стандартные эритроциты (групп 0, A, B). Исследование проводится с применением средств индивидуальной защиты: перчаток, медицинских очков, халата.

Порядок выполнения анализа:

1. промаркировать планшет с помощью уникального кода, однозначно связанного с донором/реципиентом трансфузии;
2. образец крови, полученной от пациента, оставить в покое на 30 минут, отделить сыворотку пипеткой;
3. разметить планшет в два ряда по три лунки: в первом ряду подписать лунки анти-A, анти-B, анти-AB, во втором ряду 0, A, B, строго соблюдая порядок;
4. нанести по большой капле цоликлонов в лунки первого ряда в соответствие с подписями;
5. нанести по маленькой капле стандартных эритроцитов в лунки второго ряда, согласно подписям;
6. поместить пипеткой Пастера по большой капле сыворотки исследуемой крови рядом с каждой каплей стандартных эритроцитов;
7. этой же пипеткой поместить по капле эритроцитов рядом с каждой каплей цоликлонов;
8. перемешать стеклянными палочками капли образца и диагностикума. Для каждого перемешивания следует использовать новую чистую палочку;
9. покачивать планшет в течении 3 минут и наблюдать за изменением состояния смесей.

Если в лунке образовались видимые глазом глобулы, сгустки или хлопья, то произошла реакция агглютинации – слипания эритроцитов в присутствии специфичных антител. Если же смешанная капля осталась равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинация отсутствует.

Возможны следующие четыре варианта:

• образец сыворотки исследуемой крови дал реакцию агглютинации со стандартными эритроцитами A и B, а эритроциты исследуемой крови не дали реакции агглютинации со всеми цоликлонами (или сыворотками) – кровь принадлежит группе 0(I);
• образец сыворотки исследуемой крови дал реакцию агглютинации только со стандартными эритроцитами B, а эритроциты исследуемой крови дали реакции агглютинации цоликлонами (или сыворотками) анти-A, анти-AB – кровь принадлежит группе A(II);
• образец сыворотки исследуемой крови дал реакцию агглютинации только со стандартными эритроцитами A, а эритроциты исследуемой крови дали реакции агглютинации с цоликлонами (или сыворотками) анти-B, анти-AB – кровь принадлежит группе B(III);
• агглютинация сыворотки со всеми стандартными эритроцитами отсутствует, агглютинация эритроцитов исследуемой крови наблюдается со всеми цоликлонами – кровь принадлежит группе AB(IV).

В последнем случае проводят отрицательный контроль для исключения неспецифичной агглютинации. При перемешивании эритроцитов исследуемой крови с физраствором (0,9% NaCl) полученная смесь должна оставаться равномерно красной без образования сгустков.